mMESSAGE mMACHINE® T7 Ultra 试剂盒结合了新的帽类似物、抗反向帽类似物 (ARCA) 和获得专利的高得率转录技术,以生成 RNA 转录本,与翻译后其他转录本相比可获得更高的蛋白质得率。mMESSAGE mMACHINE® T7 Ultra 试剂盒的优势:
•从体外转录的 RNA 合成更多蛋白
•可在体外和体内更高效地表达 RNA 转录本
•使用随附的多聚腺苷酸尾试剂稳定体内转录本
ARCA 加帽 RNA 更具有翻译活性
ARCA 中的碱基修饰导致其仅以功能性、可翻译的方向掺入;而传统帽类似物被掺入的方向有功能性和非功能性两个方向。因此,将 ARCA 掺入到转录反应中会产生 100% 可翻译的加帽 RNA。在 mMESSAGE mMACHINE® T7 Ultra 转录本中加入了多聚腺苷酸尾,这进一步得到了加强。对比 ARCA 和 ARCA/多聚腺苷酸尾转录本与帽类似物和帽类似物/多聚腺苷酸尾转录本的实验表明,使用 ARCA 加帽 RNA 时蛋白合成水平更高。
什么是 ARCA?
ARCA 是一个经过修饰的帽类似物,其中 3' OH 基团(接近 m7G)被 OCH3 替换(参见示意图)。由于该取代,RNA 聚合酶只能使用剩余的羟基团启动转录,迫使 ARCA 以正向掺入。因此,5' 端与 ARCA 合成的转录本 100% 可翻译,导致对翻译产生强刺激性效应。
对体外转录 RNA 进行正确加帽
对 RNA 进行正确加帽可促进蛋白合成的正确启动,以及体内 mRNA 的稳定性和加工。无帽 RNA 在显微注射或转染到细胞中后会被细胞 RNase 快速降解。加帽 RNA 通常能在体外翻译系统中更高效地翻译,生成了具有仅以功能性方向掺入的帽类似物的 RNA。因此,用ARCA取代传统的帽类似物能保证合成 100% 可翻译的加帽 RNA。