您好!欢迎来到江苏麦格生物科技有限公司!
400-0156-528 工作日:09:00-17:30
您当前的位置:
发布日期:2024/1/22 11:53:00

在ELISA实验中如何准确的稀释样本

一、在ELISA实验过程中,超过试剂盒检测范围的,一般有这几种情况。
1、样本中待测物含量过高。一些高丰度蛋白来说,比如免疫球蛋白、脂联素、C肽、载脂蛋白等,在样本中本身含量就很高,有的达到mg/mL浓度。

2、一些受诱导表达的细胞上清中,大量表达,比如小鼠细胞诱导后,大量表达肿瘤坏死因子α(TNFα),小鼠胰岛细胞受诱导后,大量表达胰岛素(INS)。

3、在一些感染性疾病中,大量表达,比如乙肝表面抗原、C反应蛋白。

4、疫苗原性研究时,注射疫苗的小鼠,会产生大量针对疫苗的抗体。

5、一些被浓缩的样品,比如重组蛋白的产物,单克隆抗体纯品等。


二、在ELISA检测过程中,经常会遇到样本测定OD值超过标曲最高点OD值,造成测定数据无法直接使用。那么样本稀释容易犯的错误有哪些?

1、稀释不足。稀释倍数不足时,容易导致最终结果偏小。

2、过度稀释。过度稀释时,容易导致最终结果偏大。

3、稀释不够规范,引入很多人为偏差。稀释不够规范,特别是大比例稀释时,人为偏差大大增加。


三、样本稀释的原则如下:在查询背景知识,或者通过预实验,确认了样本浓度过高,需要进行稀释,就要根据以下原则,严谨操作和计算。

1、稀释倍数合理。稀释后样本测定的OD值,要求落在标准品最高值OD值的半量程内,假定标准品最高值的OD值是2.4,那么稀释后的样本,OD值接近1.2,在这个范围附近,计算的浓度值最为准确,以这个结果乘以稀释倍数,得到的样本浓度最准确。

2、稀释过程规范。特别是大倍比的稀释,最好是梯度稀释。比如样本要稀释200倍,就先稀释10倍,再在10倍稀释的基础上,再进行稀释20倍,得到200倍。

如有需求请联系我们!

专业代理,原装正品 ,并备有大量现货。
品质保证,现货供应,可全国发货,质量保证,售后无忧。

上一篇:细胞传代实验 下一篇:冰冻切片免疫荧光实验