冰冻切片包埋剂的制备方法及注意事项
制备步骤:
将组织在恒温冷冻机里面切片。冷冻腔内的温度一般设置为-18℃至-25℃，根据不同组织调节不同腔温，平时应将冷冻头放置在冷冻台上。冷冻切片机应长期处在冷冻恒温状态。
1、当冰冻组织提取好之后，在冷冻头上放少量的OCT或羧田基纤维素(可用普通胶水代替)，放上组织，速冻。
2、待组织冻结后，将冷冻头装刀切片机上。
3、粗切，修出切面细切几张，用毛笔刷去刀上组织片。
4、放下抗卷板，开始切片，切片速度一般为5-6微米，切出的片子用载玻片贴附后立即放入甲醇冰醋/酸液(97ml甲醇+3ml冰醋/酸)中固定，固定时间为10-20秒。
注意事项:
1、速冻是冰冻切片的关键，因为只有速冻才能减少组织内的冰晶，办法就是将速冻头迅速压在组织上，切好后就可以冻片，特别适用于较脆的组织。
2、固定切片后应立即放入甲醇冰醋/酸中固定，不能等切片干后再固定，后者容易造成细胞退变。固定液有很多种，甲醇作用快、收缩小、染色较清晰，是冰冻切片最理想的固定液，而每97ml加入冰酸醋3ml，会减少某些胶质、钙质较多的组织不容易掉片。
3、包埋剂可用普通胶水代替，但要加入适量的水(胶水与水的比例大约在2:1)。太稀了容易损伤切片刀，太稠了黏在刀上不容易洗掉，影响切片的质量。
4、冰冻用切片刀不仅要磨得快，而且要磨得直，否则切出来的片子就会不平整，不能进入抗卷板(最好使用一次性刀片)。
5、如组织发脆，可以等几分钟后再切，也可用手在组织上稍微加温;如果用手去摸组织块，最好戴手套，或用玻片间的纸夹在手与组织之间，以防感染。
6、冷冻室的室温冬天一般设置在-19℃左右，夏天设置在-22℃左右。不同的组织有不同的温度要求，如肝脏、甲状腺组织温度应设置在-15℃左右，脂肪组织一般设置在-35℃以下。
7、冷冻切片机应长期处于恒温冷冻状态，经常的开关电源容易造成设备损坏。
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