PBS磷酸盐缓冲液的配置方法及作用
PBS溶液又称磷酸盐缓冲溶液,一般选择Na2HPO4和KH2PO4配制,因为钠盐溶解的较慢。根据不同pH的溶液,称量不同质量的磷酸盐,也可以用pH计调溶液的pH。PBS一般用作支持电解质。
由于Na2HPO和KH2PO4有二级解离,缓冲的PH值范围很广,而NaCI和KCI主要作用为增加盐离子浓度。
如有需要PBS还可以补加1mmoI/L CaCI2和0.5mmoI/L MgCI2,以提供二价阳离子。
配置方法:
采用去离子水、KH2PO4和Na2HPO4·2H2O配制PBS溶液,按以下步骤进行:
(1) 配制1/15mol/L KH2PO4,即每升水中溶解9.078克KH2PO4;
(2) 配制1/15mol/LNa2HPO4·2H2O,即每升水中溶解11.876克Na2HPO4·2H2O;
(3) 将18.2%(体积分数)KH2PO4溶液和81.8%Na2HPO4·2H2O混合;
各值配置:
测定PBS液的PH值约为7.4。磷酸盐缓冲液 取磷酸二氢钠38.0g,与磷酸氢二钠5.04g,加水使成1000ml,即得。
磷酸盐缓冲液(pH2.0) 甲液:取磷酸16.6ml,加水至1000ml,摇匀。乙液:取磷酸氢二钠71.63g,加水使溶解成1000ml。取上述甲液72.5ml与乙液27.5ml混合,摇匀,即得。磷酸盐缓冲液(pH2.5) 取磷酸二氢钾100g,加水800ml,用盐酸调节pH至2.5,用水稀释至1000ml。
磷酸盐缓冲液(pH5.0) 取0.2mol/L磷酸二氢钠溶液一定量,用sodium hydroxide试液调节pH值至5.0,即得。磷酸盐缓冲液(pH5.8) 取磷酸二氢钾8.34g与磷酸氢二钾0.87g,加水使溶解成1000ml,即得。
磷酸盐缓冲液(pH6.5) 取磷酸二氢钾0.68g,加0.1mol/Lsodium hydroxide溶液15.2ml,用水稀释至100ml,即得。磷酸盐缓冲液(pH6.6) 取磷酸二氢钠1.74g、磷酸氢二钠2.7g与氯化钠1.7g,加水使溶解成400ml,即得。
磷酸盐缓冲液(含胰酶)(pH6.8) 取磷酸二氢钾6.8g,加水500ml使溶解,用0.1mol/Lsodium hydroxide溶液调节pH值至6.8;另取胰酶10g,加水适量使溶解,将两液混合后,加水稀释至1000ml,即得。
磷酸盐缓冲液(pH6.8) 取0.2mol/L磷酸二氢钾溶液250ml,加0.2mol/Lsodium hydroxide溶液118ml,用水稀释至1000ml,摇匀,即得。
磷酸盐缓冲液(pH7.0) 取磷酸二氢钾0.68g,加0.1mol/Lsodium hydroxide溶液29.1ml,用水稀释至100ml,即得。
磷酸盐缓冲液(pH7.2) 取0.2mol/L磷酸二氢钾溶液50ml与0.2mol/Lsodium hydroxide溶液35ml,加新沸过的冷水稀释至200ml,摇匀,即得。
磷酸盐缓冲液(pH7.3) 取磷酸氢二钠1.9734g与磷酸二氢钾0.2245g,加水使溶解成1000ml,调节pH值至7.3,即得。
磷酸盐缓冲液(pH7.4) 取磷酸二氢钾1.36g, 加0.1mol/Lsodium hydroxide溶液79ml,用水稀释至200ml,即得。
磷酸盐缓冲液(pH7.6) 取磷酸二氢钾27.22g,加水使溶解成1000ml,取50ml,加0.2mol/Lsodium hydroxide溶液42.4ml,再加水稀释至200ml,即得。
磷酸盐缓冲液(pH7.8) 甲液:取磷酸氢二钠35.9g,加水溶解,并稀释至500ml。乙液:取磷酸二氢钠2.76g,加水溶解,并稀释至100ml。取上述甲液91.5ml与乙液8.5ml混合,摇匀,即得。
磷酸盐缓冲液(pH7.8~8.0) 取磷酸氢二钾5.59g与磷酸二氢钾0.41g,加水使溶解成1000ml,即得。
作用:
PBS缓冲液的作用:
PBS是磷酸缓冲盐溶液的简称,不仅伪狂犬病毒要用它稀释,一般的有活性的生物制剂都要用它来稀释。
原因就是它具有盐平衡、可调整的适宜pH缓冲作用,蒸馏水不具有盐平衡作用,可以破坏生物蛋白的结构及生物特性;生理盐水不具有调整pH的作用,对完整的、具有活性的物质不能保证其在最适条件下参与生物反应,所以使用PBS是first choice。
PBS也不是universal的,有的生物活性物质需要的条件比PBS还要高,就需要在平衡缓冲液中加入更多的成分,维持最佳的条件保证生物活性物质保持其最完整的特性。
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