细胞分离液的介绍及操作步骤

细胞分离液是一种经过聚乙/烯吡/咯/烷酮处理过的硅胶颗粒，经过高速离心后可形成连续密度梯度，由于散常数低，所形成的梯度非常稳定。
分离液采用预先形成的密度梯度时可在低离心力于数分至数+分钟内达到满意的细胞分离结果。
此外，分离液不穿透生物膜，对细胞无毒害，因此广泛用于分离细胞、亚细胞成分、细菌及病毒，还可将受损细胞及其碎片与与完好的活细胞分离。
特点：
1、适合分离细胞、亚细胞和大病毒，渗透压均匀，粘度低，可调至生理离子强度和PH，分离条件温和，对细胞无毒性，可以灭菌消毒。
2、渗透性低不穿透细胞、密度高、无毒害，是目前较理想的介质。
3、密度梯度离心已被多次成功的用于动物细胞及其他细胞的分离，纯化了包括人血液细胞、骨髓细胞、红血球细胞、白血球细胞、淋巴细胞、肝细胞等在内的十余种动物细胞。
4、生产过程符合GMP及美国药典标准，无菌即用内毒素含量低。
5、分离效果好。
原理：
细胞分离液是一种生物实验中常用的试剂，用于细胞和原生质的分离。它以溶胀剂的形式的出现，具有易于发挥作用，高效率，不容易变质，适用范围广，用途多样等特点，已经得到广泛的应用。
细胞分离液通常由一种混合物组成，包括一个弱酸、一个含磷衍生物和一个溶体提取剂。这种混合物对于对抗厌氧细菌、改变细胞外层形态和改变细胞之间的水平微生物检测非常有效。
细胞分离液的基本原理是通过脱水膜破坏作用使细胞极性变化，从而产生脱胶作用，进而达到细胞的分离效果。细胞分离液的作用原理是溶解细胞结构中的一些有机物质，从而导致细胞脱水，进而影响细胞膜的结构，达到细胞分离的目的。
细胞分离液的应用非常广泛，它可以用于细胞培养、细胞测序、遗传学实验和药物研究等。由于它具有简便快速、无毒无副作用等特点，细胞分离液可以用于日常生物实验，确保细胞的健康和恢复状态。总而言之，细胞分离液是生命科学、医学实验和其他生物技术领域中不可缺又重要的技术工具。
操作步骤：
1、取新鲜抗凝全血或者去纤维蛋白血液，用等体积的全血及组织稀释液或者PBS稀释全血。
2、在离心管中加入适量分离液，将稀释后的血液平铺到分离液液面上方，注意保持两液面界面清晰。
3、室温，水平转子500~1000g，离心20~30min。
4、离心后将出现明显的分层：上层是稀释的血浆层，中间是透明的分离液层，血浆与分离液之间的白膜层即为淋巴细胞层，离心管底部是红细胞与粒细胞。
5、小心的吸取白膜层细胞到15mL洁净的离心管中，10mLPBS或细胞洗涤液洗涤白膜层细胞。
6、弃上清，5mL的PBS或细胞清洗液重悬细胞，250g，离心十分钟。
7、再次弃上清，5mL的PBS或细胞清洗液重悬细胞，250g，离心十分钟。
8、弃上清，细胞重悬备用。
细胞分离液装样与取样方法：
装样时样品体积和细胞浓度根据不同细胞而异，一般加样体积不宜过大，细胞浓度也不可过高，否则会影响细胞的分离和回收。
取样：当所要分离的细胞绝大部分在两层的界面时，可逐层去除液后收集界面部位的细胞;有时大部分细胞位于层中,则需要逐层收集。收获含有液的细胞经两次洗涤后可供培养或检测用。

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