一、待检样本会非特异性的和蛋白结合，从而导致背景过高，因此可以用BSA或血清封闭掉这部分非特异性的结合，从这点看，BSA和血清没有明显区别。
二、待检样本中可能会有Fc受体，可以和抗体恒定区结合，与抗体特异性无关，封闭血清中有抗体，因此用血清可以封闭掉一抗及二抗和样本Fc受体之间结合。BSA则无法封闭Fc受体。
所以二抗来源的动物血清封闭的是组织上带电荷基团。
因为组织中非抗原抗体反应出现的非特异性背景染色，最常见的原因是蛋白吸附于高电荷的胶元和结缔组织成分上。
这并不影响接下来一抗的结合，因为这种结合是特异的，亲和力远远高于因电荷作用的结合，因此会竞争胜出。
免疫组化中用血清封闭的较多。
封闭血清一般选择和二抗同一来源的（如一抗为兔来源多抗，二抗为山羊抗兔IgG，那封闭液就用山羊血清），血清中动物自身的抗体，预先能和组织中有交叉反应的位点发生结合，否则在后面的步骤中如果和二抗发生结合，会造成背景。
但要注意封闭用血清中不能含有目标蛋白，且与一抗来源不同。
另外二抗因尽量少选取兔子或老鼠来源的，因为这两个在亲缘关系上和人类非常接近，所以产生交叉反应的机会就比较大，从而导致背景比较高。!适合选用来源于驴，山羊，绵羊等的二抗，背景相对就很低。
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