1、制备方法:
制备脂质体的方法主要有三种:薄膜分散法、超声波分散法和乳化法。
薄膜分散法是将磷脂等脂质材料溶解在有机溶剂中,形成薄膜,然后将薄膜分散在水中,通过搅拌、抽滤等手段制备出脂质体。该方法操作简便,适合大量制备,但制得的脂质体大小不均。
超声波分散法是利用超声波的振动能量将脂质体分散在水中,制得的脂质体大小均匀,但产量较低。
乳化法是将磷脂等脂质材料溶解在有机溶剂中,然后加入水,通过高速搅拌、乳化等手段制备出脂质体。该方法操作简单,适合大量制备,制得的脂质体大小较均一。
制备脂质体时,需要选择适当的制备方法,以确保制得的脂质体具有理想的粒径大小和分布,同时需要控制脂质体的成分和稳定性。在选择制备方法时,需要考虑实际应用的需要,例如药物输送、生物医学应用等方面。
2、脂质体转染的操作步骤:
(1) 细胞培养:取 6 孔培养板 (或用 35 mm 培养皿),向每孔中加入 2 mL 含 1~2×105 个细胞培养液,37℃ CO2 培养至 40%~60% 汇合时 (汇合过分,转染后不利筛选细胞)。
(2) 转染液制备:在聚苯乙稀管中制备以下两液 (为转染每一个孔细胞所用的量)A 液:用不含血清培养基稀释 1-10 μg DNA,终量 100μL,B 液:用不含血清培养基稀释 2-50 μgLR,终量 100μL,轻轻混合 A、B 液,室温中置 10-15 分钟,稍后会出现微浊现象,但并不妨碍转染 (如出现沉淀可能因 LR 或 DNA 浓度过高所致,应酌情减量)。
(3) 转染准备:用 2 mL 不含血清培养液漂洗两次,再加入 1 mL 不含血清培养液。
(4) 转染:把 A/B 复合物缓缓加入培养液中,摇匀,37℃ 温箱置 6~24 小时,吸除无血清转染液,换入正常培养液继续培养。
(5) 其余处理如观察、筛选、检测等与其它转染法相同。
注意:转染时切勿加血清,血清对转染效率有很大影响。
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