产品简介：
CCK-8 试剂盒，是一种基于 WST-8 的广泛应用于细胞增殖和细胞毒性的快速高灵敏度 检测试剂盒。 WST-8 是一种类似于 MTT 的化合物， 在电子耦合试剂 1-Methoxy PMS 存在的情况下，可以被还原生成橙黄色水溶性的甲臜(Formazan)。细胞增殖越多越快，则颜色越深；细胞毒性越大，则颜色越浅。对于同样的细胞，颜色的深浅和细胞数目呈线性关系。
使用方法：
1、在 96 孔板中接种细胞悬液(100 ul /孔)，通常细胞增殖实验每孔约 2000 个细胞， 细 胞毒性实验每孔约 5000 个细胞，具体每孔所用的细胞的数目， 需根据细胞的大小，细胞增 殖速度的快慢等因素决定)。
2、按照实验需要，进行培养并给予 0- 10ul 特定的药物刺激， 处理一段适当的时间(例如: 6,12, 24 或 48 小时)。
3、每孔加入 10ul CCK-8 溶液。如果起始的培养体积为 200ul，则需加入 20ul CCK-8 溶 液，以此类推。可以用加相应量细胞培养基和 CCK-8 但不加细胞的孔作为空白对照，若担 心所使用的药物会干扰检测， 需设置加相应量细胞培养液、药物和 CCK-8 溶液但不加细胞 的孔作为空白对照。
4、在细胞培养箱内继续孵育 1-4 小时，具体时间可以通过预实验确定。预实验时可以 在 0.5 、1、2 和 4 小时后分别用酶标仪检测， 然后选取吸光度范围比较适宜的一个时间点用 于后续实验。
5、用酶标仪测定在 450 nm 处的吸光值， 若无 450nm 滤光片，可以使用 420-480nm 的 滤光片。如果样品为高浑浊度的细胞悬液，可以使用大于 600nm 的波长，例如 650nm，作 为参考波长进行双波长测定。
6、如果需要暂时不测定 O.D 值， 可以向每孔中加入 10ul 0. 1M HCl 溶液或者 1% w/v 的 SDS 溶液，避光保存在室温，24 小时内吸光度不会发生变化。
实验结果分析：
细胞活力 = [OD(加药) - OD(空白)] / [OD(0 加药) - OD(空白)]  ×100% 抑制率 = [OD(0 加药) - OD(加药)] / [OD(0 加药) - OD(空白)]  ×100%
OD(加药)：具有细胞、 培养基、 CCK-8 溶液和药物溶液的孔的吸光值
OD(空白)：具有培养基、 CCK-8 溶液，没有细胞的孔的吸光值
OD(0 加药)：具有细胞、 培养基、 CCK-8 溶液，没有药物溶液的孔的吸光值

注意事项：
1、使用 96  孔板进行检测时， 如果细胞培养时间较长，请注意蒸发问题。可将 96  孔板 外围一圈加培养基、水或 PBS  保湿。同时，可以把 96  孔板置于培养箱内靠近水盘的位置 以缓解蒸发。
2、培养时间根据细胞种类的不同和每孔内细胞数量的多少而不同。在正式实验前，建 议先做预实验摸索铺板的细胞数量以及加入 CCK-8  试剂后的培养时间。
3、铺板时请注意保证每个孔细胞数量均匀，建议铺板过程中注意时常混匀，防止因细 胞沉淀造成不均匀。加入 CCK-8  后请前后左右轻轻晃动培养板数次，使培养基和 CCK-8  溶 液充分混匀。
4、本试剂盒的检测依赖于脱氢酶催化的反应，如果待测物质有氧化性或还原性，可在 加 CCK-8  之前更换新鲜培养基，去掉药物的影响。若药物影响比较小的情况可以不更换培 养基，直接扣除培养基中加入药物后的空白吸收即可。
5、加入 CCK-8  时， 如果细胞培养时间较长， 培养基颜色或 pH  值已变化，建议换用 新鲜的培养基。
6 、用酶标仪检测前需确保每个孔内没有气泡， 否则会干扰测定。
7、本试剂盒系无菌灌装生产。在使用过程中， 请在生物安全柜内无菌操作， 避免污染。
8 、为了您的健康和安全，请穿着实验服并戴一次性手套或乳胶手套操作。

保存方法：
长期保存建议-20℃保存， 可保存 2 年， 但不能反复冻融。
0-5℃条件下可保存一年。

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